우리는 꿀벌알프 알이 두 가지 실험을 수행하여 휘발성 항균을 방출하는지 여부를 조사했습니다. 첫 번째 테스트에서는 3개의 꿀벌이 들어 있는 무리 세포(N = 16)를 사용했습니다. 상기와 같이 꿀벌을 모래로 채워진 페트리 접시에 인공 무리 세포로 옮겼다. 계란과 계란없이 꿀벌 중 하나 (실험 꿀벌)와 꿀벌은 물리적 인 접촉없이 동일한 인공 무리 세포에 함께 배치되었다. 계란이없는 다른 꿀벌 (대조군)은 다른 인공 무리 세포 (다른 페트리 접시)에 홀로 보관되었습니다. 우리는 위에서 설명한 대로 곰팡이 감염의 타이밍을 모니터링했습니다. 우리는 전술한 바와 같이 생존 분석을 사용했다. 다시, 유충의 (가능성) 효과를 고려하기 위해, 우리는 또한 유충이 부화 할 때까지 배관에서 기간 동안 분석을 수행 (oviposition 후 3 일). 3일까지 이미 상당한 차이는 계란에서 방출되는 휘발성 물질에 의해서만 발생할 수 있습니다. 아스퍼질러스 분리에 대한 복제의 수는 무리 세포로부터 분리 (N = 20) 및 다섯 개의 추가 곰팡이 (N = 8)에 대한 텍스트에 주어졌다. 불행하게도, 위에서 언급 한 바와 같이, 우리는이 실험의 모든 페트리 요리의 사진을 찍지 않았다. 결과는 예외없이 중간 사례없이 명확했다.

이것은 또한 재료 및 메서드에 명시되어 있지만 이제 개정 된 텍스트에 더 잘 설명되어 있습니다. 2014년 6월부터 8월까지 일리노이 주 어바나 대학교 꿀벌 연구 시설에서 관리하는 양봉장에서 1일 된 성인 꿀벌을 얻었습니다. 퍼페를 포함하는 벌집 의 프레임은 자연적으로 짝짓기 여왕이 이끄는 식민지에서 제거하고 인큐베이터 (34 ° ± 1 ° C, 45 %±10 % RH)에 배치되었습니다. 새로 나타난 성인 꿀벌 (1-18 h 세)은 10 개의 그룹으로 배치되었으며, 각 꿀벌은 개별 인식을위한 독특한 색상으로 표시되어 있습니다. 꿀벌은 수직 방향의 페트리 접시(100 X 20 mm)에 보관하고, 밀랍 파운데이션 시트를 접시의 베이스(“벽”)에 배치하여 하이브 조건을 모방하였다. 요리는 꿀 (~ 1.4 ml), 30 % 자당 용액 (2ml) 및 신선한 냉동 꽃가루와 30 % 설탕 용액 (~ 10mm 직경 공)의 튜브 1 튜브와 함께 공급되었습니다. 플레이트 다이어그램은 S1 도무에서 찾을 수 있습니다. 페트리 요리는 25°C의 어두운 기후 챔버에서 배양되었습니다. 모든 꿀벌은 3 일 동안 입체 현미경으로 곰팡이 성장을 주의 깊게 검사했습니다 (하루에 두 번).

결과적으로, 곰팡이 성장의 첫 징후는 우리가 도움받지 않은 눈을 사용하는이 연구의 다른 실험보다 일찍 발견되었습니다. 상기와 같이 생존 분석을 사용하여 데이터를 분석했다. 합성 NO는 꿀벌알에 의해 방출되는 가스와 유사한 항진균 효과를 가지고 있는지 여부를 평가하기 위해 이 실험의 효과 크기(위험비율)를 비방벌된 꿀벌에 대한 계란 생산 가스의 효과에 대한 데이터 테스트와 비교했습니다(실험의 일환으로 `결합 된 효과`, 아래 를 참조하십시오). 위험 비율의 95% 신뢰 구간이 겹치는 경우 효과 간의 차이에 대한 증거는 없습니다. PLOS 및 PubMed 중앙 페이지 보기 및 다운로드의 합계. 두 번째 분석의 경우, 우리는 꿀벌알에서 방출되는 휘발성 물질에 다양한 스펙트럼의 곰팡이를 노출했습니다. 배양 배지(맥아 추출물 한천 또는 사부라우아-한천[아틀라스, 2004])를 함유하는 페트리 설거지(10cm)는 상이한 곰팡이 균주로부터 코니디아로 접종하였다(아스퍼질러스 플라부스 균주 A, 트리코코마체아, 감염된 꿀벌 무리 세포로부터 분리된, [ Engl et al., 2016], N = 20; A. 플라부스 균주 B, 무코르 시르시넬로이드, 무코라세과; 페니실륨 로케포르티, 트리코코마체과; 칸디다 알비칸스, 사카로미세타과; 트리코피톤 루브룸, 관절과; N = 8 모든 후자의 균주 및 종; 이들은 친절하게 뷔르츠부르크 대학 병원의 위생 및 미생물학과에 의해 제공되었다).

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